实验研究。

　　FaS介导的病理性瘢痕成纤维细胞的凋及部分相关死信号递质的传递鲁峰。高建华。黎小间讨3广在其相应圮言号通道中的作方法取手术切除的增生性瘢痕和，痕疙秦纽织各6阢通过细，培养68代后以邮肘为处理因素作用于增生性瘢痕及瘢痕疙瘩成纤居细胞24小时，比较两者；周率。同时。

　　应用枯附式细胞仪检测，作用下胞内2++的变化，结果，增生性瘢痕成纤维细胞在工作浓度以上的，01作出下随5羊抗浓度时增向其满手不断增句而板痕绝塔成纤雄细这在各浓度梯度下。均未发，明多的；周，且各组间无显著差异，在8肘沿1.作用下增生性瘢痕成纤维细胞内，32+显著增高而瘢痕疾疼成奸居细胞内，32+无变化，在，淑肘31.作用下，增生性瘢痕瘢痕疙瘩成纤维细胞内+均下降，两组间无显著的差结论，瘢痕疙瘩成纤居细胞有别于增生性瘢痕成纤居细胞。8肘31不能诱导其产生正常的网。鉴于5介导的；周被认为是介导圯言号；专递的*主要通道。介导凋的异常可能是瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖洲调控异常居细胞凋中起着重要作用；1+参与了成纤居细胞内，办信号的传递；但1+作为重要的信号递质。它的变化并非88介导成汗居细胞凋所必需的。

　　病理性瘢痕是目前整形外科界个棘手的问伤口界限，呈蟹足样浸润生长，侵犯临近组织，自始至终难以退化且单纯手术切除后易复发等特点1.近年来，关于病理性瘢痕形成机理的研究仍兰要集中在细胞，殖胶原代谢等方面，目前仍缺乏有力的证据解释病理性瘢痕高度，殖的具体机理。

　　基金项目国家自然科学基金资助项目39870807调控的程序性的细胞死在瘢痕研究领域也越来越受到重视。近年来研，发现，在肉芽组织转变为瘢痕组织的过程中。存在着大量的成纤维细胞凋，细胞凋的异常往往出现异常的瘢痕化2闪此。

　　成纤维细胞被认为是瘢痕形成增生挛缩的功能性细胞，其增殖活化分化的调控异常可能直接导致瘢痕疙瘩的形成38，4系统广泛分布于人体各组织，在正常皮肤和病可性瘢痕组织内都分布它在调控细胞增殖和凋中所起的重要作用在众多研究领域中已得到广泛的重视，而且；18介导的凋还被认为是介导死信号传递的*主要通置夂但在，痕形成机制领域中的研允。内外尚处于起步阶段其相应的倍传导系统未涉足故作者研究了病理性瘢痕成纤维细胞中38信号传导作为研究对象，以探讨它在病理性瘢痕形成过程中的可能作用。

　　1材料和方法1.1材料II1本实验所瘢痕疙瘩和增生性瘢痕均取自南方医院整形外科手术患巷均经临床及病理诊断证实。瘢痕疙瘩患者6例，男女各半。病变部位分，为1垂及前胸。增。性嫩拟患者6例。4例，女2例。病变部位为足和肘部。年龄2228岁。

　　1.1.2晷咖培养基美国0，公司产品，5典入河荧光染料。3，人肘荧光染料为1公司产品。胎牛血清为美国公司产品。

　　1.2方法1.2.1成纤维细胞的培养将手术切下的瘢痕疙瘩和增生性瘢痕组织在无菌条件下切除其皮，在少量胎牛血清中将标本切成左右的组织块置于培养瓶中。在95空气，5氧化碳37，饱和湿度条件下培养68小时，使组织块牢固地粘附在瓶壁上。然后加入含15胎牛血清的0河国0，生产培养基适量，继续培养，34天换液1次，23周后原代细胞生长成单层，用0.25胰蛋白酶消化后，按13的比例传代培养此后每2 3天换液1次，每45天分种传代1次，实验用第68代细胞1.2.2透射电镜观察选优质琼脂糖，用蒸馈水配成2的浓度。加热洛解后取约61加入的锥形离心管中，然后垂直放入根锥形的玻璃棒，冰水丈用。卞整形外科枭志2008月吊4阳瓶处，指数生晟的细胞，加入。仲各瓶浓度达到10吨14作95空气，5化碳37饱和湿度条件下孵育24小时；用0.25的胰蛋白酶消化后加入离心管内，1000，1离心5分钟，弃上清，加入适量，83混匀；将细胞悬液加入有琼脂空槽的离心管中，离心800100押；取出离心管中的琼脂，尖刀切下细胞团块；将细胞团投入含2.5戊醛的固定液中，4，保存，65清洗细胞团次；1锇酸后固定3060分钟；常规电镜样品制备程序，脱水浸透过锂超薄切片铀铅染色后透射电镜1观察照相。

　　1.2.3流式细胞仪染检测1山诱导的病理性瘢痕成纤维细胞的凋各取6瓶处于指数生长期的细胞，加入，使各瓶浓度分别达至1 181在95空气5氧化碳37，饱和湿度条件下孵育24小时，0.25胰蛋白酶消化后收集于离心管中。100，离心5分钟。，35洗遍，以70冰乙醇固定细胞12小时以上，83离心沉淀去除固定液。加5001染液合，001如3流式细胞仪上进行细胞丽人含量分析，以1分1常细胞和凋细胞，1.2.4，38，止作用下成纤维细胞内，amp；+变化的粘附式细胞仪检测取处于指数生长期的细胞，用0.25的胰蛋白酶消化后，加入适量含15胎牛血清的0，±音养基吹打后按每含细胞1父5的密度接种到，培养中，在95空气5氧化碳37，饱和湿度条件下孵育810小时，使细胞究全贴壁并仲展呈梭形将培养取出。

　　室温下88液漂洗3次，加入2，爪1荧光染，1.如隧标记胞内，3矿，37避光孵育3040分钟，31液漂洗次加入0.

　　5液待检测。，将己染色细胞的掊养置尸人3570交互台上，先直观地扫描测定细胞内染料初始荧光强度，得到细胞1象，23分钟后分，加入不同浓度梯度的心1.止观察随时的货化。胞内12 +的变化，绘制各时间荧光值曲线。

　　1.2.58，止作用下成纤维细胞内，1+变化的测定根据时间荧光值曲线所提供的各种类溶髹棘脂凝固后抽出棒心，保各用各取。1型作用，内荧光值变酬青况计算在相同，间间隔内015分钟。波峰波谷与作用点间荧光比值的差值。

　　1.2.6统计学分析所得数据用均数标准差。统计处理应用51软件，采用7检验和1检验进行比较分祈2结果2.生性瘢痕成纤维细胞在10，的以啪，作用下，通过透射电镜可以观察到细胞皱缩染色质叫缩边集等凋特征性形态学改变。

　　2.2实验结果显增生性瘢痕成纤维细胞随着浓度梯度的增高，其凋率不断增高；瘢痕松培成纤维细胞在各浓度梯度下周率七著差异。两者之间的差异具有统计学意义户0.01.

　　2.3实验结果显各有效浓度，河，必作用啤，生忭瘢拟成纤维细胞内1显著升高，而瘢痕挖瘩成纤维细胞内32+无明显变化，两因此，在纤维细胞是创伤愈合瘢痕形成，生和挛缩的功能性细胞，其，殖凋1的异常接导致痕疙瘩的形成2，但目前仍缺乏导致这种异常的细胞生物学证据。

　　卵195受体属于1型跨膜蛋白，主要分布在人活化的18淋巴细胞膜面，在1常皮肤及病理性瘢痕成纤维细胞膜上亦有分布。其相应的配体及单立隆抗体与之结合后可诱导细胞凋1随着细胞生物学和免疫学的进展。已证次735以系统在调控细胞，殖和凋中起着，要的作用3，而且，38介导的凋还被认为是介导死信号传递的*主要通道8.

　　本实验结果发现瘢痕疙瘩成纤维细胞有别于增生性瘢痕成纤维细胞。在，作用下不能正常调，这明瘢痕挖塔这种1介导的凋抗性是导致瘢痕疙瘩成纤维细胞异常增殖高增殖低凋的细胞生物学机制之。

　　昔之刚勺羌异只统计学总义，12，2.438河作用下，增生性瘢痕和瘢痕疙瘩成纤维细胞内+均降低，两者间及异七统计7意义户瘢痕挖疼是现代医学面临的重大难。目前而言，由于人类对于瘢痕疙瘩缺乏深入的认识，其具体发生机制和有效的治疗仍长期困绕整形外科学界。

　　瘢痕疙瘩的主要病理特点现为细胞外基质说逼的过役沉机，而过度沉枳的1成分如胶原蛋白氨基己糖多糖弹性蛋白纤维粘连蛋白等要由其中的成纤维细胞所合成及分泌透射电镜发现瘢痕挖瘩中成纤维细胞的密度和活性均增高。

　　瘢痕疙瘩成纤维细胞对，38诱导的凋产生抗性的具体原因目前尚不清楚，我们考虑主要可能与以下几个方面有关，相应的38受体不达或低达。，其相应受体基结构的缺陷导致受体无功能及达。③外源性抑制蛋l如lk，l2蛋N等的过度达导致死信号的阻断。

　　倍号迎逍的研允成为前生命科学领域研究研允也受到越来越多的，樱，啤赋介导的死，号传导的具体方面仍不清楚，在病理性瘢痕方面的研，尚待起步。

　　对照增生性癜痕瘢痕疙瘩；山作用下成纤维细胞内，32+增生性瘢痕瘢痕疙瘩1士0.3 +波峰作用后高于作用前；波谷值作用前高于作用后止作用下成纤维细胞内H+的变化率增生性瘢痕瘢痕疙瘩厌摈笕柬盟。雄，故4播6侦，品猛1啸。1啤也8咖661.啤，池加32在介导的死号传导通逍中的作用，在不同的研究中到了1；同的看法=.13，19，抗刺激人8淋巴细胞，发现胞内0疒显著增高，并细胞内的0兄裂解细胞凋1密切相关但也有研究认为触发33介导的死信号的传导，不依赖细胞外，32+的作用，凋起始阶段，胞内不存在，32+上升的现象。为研究病理性瘢痕，介导的信号通道中。32+的作用，我们使用，3标记成纤维细胞内的0，2.应用粘附式细胞义检测山作用胞内的变化以解病理性瘢痕成纤维细胞内，3.介导的死信号传导通道。

　　实验发现，在3，作用下。胞内，3显著增；1；结合办1诱导病理件瘢痕成纤维细胞凋的实验结果，我们发现Cat作为Fas死信W通道中种重要的下游信号通道介质，在；18介导的病理性瘢痕成纤维细胞凋中起着重要作用站信号通道中，32+产生的不足可能是导致瘢痕疙瘩死倍号传导阻滞的原闪之。可能打接导致瘢痕疙，成纤维细胞的异常凋现象。导致；1观，作用后瘢痕挖搭成纤维细胞内心+产斗障碍的具体原因不沾范*大的可能就是信乃根本没有传递到，信号通道阻断在。2+上游。

　　现在的研宄普遍认为细胞的凋往往依赖胞内核酸内切酶的活化，降解，财双链形成寡聚核小体片段；核酸内1娜的活化需要全适的，仉环±惠胞浆内阳变化在细胞凋的核凋过程中起到重要作但吖关⑴在，介导的死号通道以著下降。这说叨1+参与成纤维细胞内信号的传递；但结果同时还显病理性瘢痕成纤维细胞内1的变化与细胞凋实验不相致，这说明十作为重要的信号递质，它的变化并非介导细胞凋所必需的，这也i以往研究所认为的Fas介导的凋是非核凋相吻合消息。

　　必芳容整巧外科杂。忘2000年8月市，吊4期目前仍未有关病理性瘢痕成纤维细胞内，介导的死信号传导通道的文献艮道。到底有哪些递质参了信传导神经酰胺是也充当第信使；神经酰胺通逍是否发4改变瘢痕疙瘩成纤维细胞内38介导的死信号通道在何处发生阻断；这鸣问的解荇为我们进步揭小木实验发现的批河不能正常诱导瘢痕疙瘩成纤维细胞凋的机理意义重大，这有待于在今后的实验中去进步探索。

　　我们相信，随着研宄的进步深入，将有助于我们从分子生物学的角度来认识瘢痕疙瘩形成的具体机制，同时也为今后瘢痕疙瘩的诊断和治疗提供条新的思路。

　　汪良能。高学书主编。整形外科学。人民卫生出版社，1989，324332.

　　撰写结构式摘要须知构式摘要分目的方法结果和结论部分各部分的撰写要求1.目的简要说明研究的目的，提出问的，由。明研究的范围和重要性。2方法简要说明研究课的基本设计，使用的材料和方法，如何分组对照，研究范围精确程度。数据如何取得，经何种统计孚方法处理。3.结果简要列出研究的主要结果和数据有何新发现，说明其价值和局限。4.结论。简要说明经验证论证取得的正确观点及其理论价值和应用人价值，是否可推广等。