目前对增生性瘢痕的治疗，仍是一大难题。有研究表明，细胞有序化消亡或细胞凋亡，是组织细胞维持正常生理功能的重要机制，核转录因子NF-kB是调节细胞生长及凋亡的重要因子，抑制核转录因子NF-kB的活性，可诱导细胞发生凋亡；成纤维细胞合成分泌胶原受到核转录因子NF-1的调控。当NF-1被激活时，便结合在前胶原基因的启动子上而诱导前胶原基因的转录与表达。本实验研究了丹参素对成纤维细胞核转录因子NF-kB、NF- 1活性的影响，进而探讨丹参素对成纤维细胞凋亡和前胶原基因转录与表达调节作用。

　　庆，汪涌，陈一飞）；美国东田纳西州立大学外科系（哈团柱）；第二军医大学长海医院烧伤科（韦多）；无锡市第二人民医院（金艳）材料与方法成纤维细胞培养：第4代人真皮成纤维细胞接种于100cmx100cm培养皿中，每3d轶液，直至细胞80%-90%覆盖。将丹参素（0.025mg/ml，等渗盐水配制）加人培养细胞继续培养，3h和8h收取细胞备用，另一组加入等量等渗盐水作对照。

　　制备核蛋白质提取物：将所取得的细胞于4丈下1000r/min离心10min，弃上清，加入400jU预冷的缓冲液，将细胞轻轻拌匀，转移至1.5ml离心管，置冰中15-20min后，加人25pi10%NP40（美国Sigma公司），充分振荡10~20s，然后4*下~2min，弃上清，将沉淀物悬浮于30~40jjJ缓冲液，充分振匀，置于冰中1 ~3h，其间每20-30min充分振荡1min.然后4下14 000xg离心15min，取上清液储存于-80*冰箱中待用。核提取物中蛋白质含量用BCA蛋白分析试剂盒（Pierce公司）测定，紫外分光光度计测定波长为梭转录因子活性的定：采用EMSA方法测定核转录因子NF-KB和NF-I的活性用末端标记法以T4聚核苷激霉素（美国Promega公司）将！>M PATP（3000ci/mmul，K）jici/m！，美国Amersham公两）标记，在NF-kB（美国Promfiga公司）和NF-I寒核甘酸（SamaCruz公司〉匕，取5jig核蛋白质提取物，与lM丨ATP标记的NF-kB或NK-丨寡核苷酸结合，将核蛋白-DNA结合反应物点样于质鸶分数为5%的非变性聚丙烯酰胺凝胶上，90V下电泳2hi凝胶取下后，进行真空加热干燥（80T），然后与X线片曝光4-12he细胞凋亡检淋h采用DWA梯度片段法。细胞收集用醑消化后1酚：《酚（1：1）提取2次，取上潸加人丨/丨体积的醋酸钠（3ml/L）、等体积的丙二醉，混后于-80放置30min，丨400（*离心t5mmT弃上请后溶于缓冲液中DNA浓度用波长260 -280nni紫外分光光度计检测，取20问JJNA进行质量分数为1.8%的琼脂糖凝胶电泳分析《MF-KB是一种可诱导的非常要的核转录因子，该核转录因子的活性劂节着一组基因的转录表达、参与免疫I炎症应激等反应|3.其粑基因包括：炎症介质（TNFa、IL-m、丨U6、丨L-8），细胞枯附因子，细胞急性应激尽蛋白等。除此之外，NF-kB也激活一组基因参与细胞生长增殖周期的调控。研究表明抑制成纤维细胞胶原心⑴基因的转录是通过NF-KB活性介导的，而抑制肿瘤细胞NF-kB的活性可使肿瘤细胞发生粳亡提示NF-kB在调控细胞生、增殖方面具有重要的功能。本实验显示，丹参素对培养的成纤维细胞作用8h后，NFKB结合活性儿乎被完全抑制，继而导致成纤维细胞发生凋亡c增生性痕的形成是由于成纤维细胞在生长增m，合成：分足世的胶原后仍不能进人凋亡阶段。

　　巳证实NF-kB参与细胞的生长增殖的调节，抑制NF-kB的活性。可导致细胞发生凋亡。本实验显示，丹参索具有诱导成纤维细胞发生凋t的作用，该作用可能与抑制jNFB的活性有关。

　　核转录因了NF-1是要的前胶原基因转录表达的因子。狡原基因的启动子上均有结合位点。、干累抑制胶原az1a本实验显示，*，参索加人培养成纤维细胞后8h，NF-l结合活怍降低近50%t检测1型前胶原al和》2mR-NA水平提示，丹参累减少I型前胶原al和a2基因的表达与其抑制NF-1的活性作用有关，表明丹参索具有调节NF4结合活性而起到减少成纤维细胞的胶原合成与分泌作用。

　　因此。丹参家对成纤维细胞的这些作用，很可能*其抑制瘢痕成纤维细胞生长、增殖以及胶原合成与分泌的细胞分子生物学机制