文章编号1000碱性成纤维细胞生长因子抗体的研究进展任哲1.杨汝德王飞。林剑21.华南理工大学生物工程系。广东广州5106艰2.暨南大学生物工程研宄所，广东广州510632inourcountty.主词成纤维细胞生长因子，碱性；细胞融合；单克隆抗体MeSHjFibroblastgiovthfactor，basic；文献标识码A，性成纤维细胞生长因子138181徽01是种重要的多肽生长因子，也是只家族中原型成员之。从1974年0，6山等1从卞脑中分离出1以来，近十多年研究明，证疋在促进血管生成2创伤愈合3骨骼修复4神经营养与修复眼晶体再屯以及胚胎的发育分化方他均显小出生物学活性。近年研究发现1奴正在恶性肿瘤组织中有强烈达，并与肿瘤病理分级分期呈正相关，同时血清中1凡正水平亦明显增高。这提小1讽达增强与肿瘤恶性程度增高侵袭力增强有密切关系。

　　可作为恶件1瘤的1期诊断与预1；指标1此，制谷柬；抗体对，立免疫学技水记量分析，研允阻断在体外体内的促细胞增殖作用，抑制肿瘤血管形成作用及阻止肿瘤恶性转化与发展都有十分重要的意义。本文就近年来在证0抗体的制备鉴定及应用等方面的研究进展作综述。

　　1娜抗体的制备，9应用免疫学技术和细胞融合技术，人们己成功制备出鼠源和兔源的，抗体。

　　1孤单克隆抗体的制备常用抗原为牛证；或人1根据融合细胞的不同。1讽；单克隆抗体的制备方法可分为两种脾细胞融介制备1单克隆抗体将1牛1沉抗原溶于54生理盐水中，与等体积的弗氏完全佐剂双推法混匀，经腹部皮下多点注射免疫雌性判16.小鼠体重18208，抗原用量每只8312周，1等量抗原只完全佐剂混匀后同上述方法免疫。再过1周后连续每周用庄0加强免疫次每只瓜⑴入化次说后次免疫34后，取免疫小鼠脾细胞与3以0细胞按己加有，腔胞3444孔的孔板培养基中进行培养。34后换液，74后可杂交瘤细胞稳定生长，14 4后开始，杂交瘤1洁筛选阳忡细胞株。

　　淋巴细胞融合制备1介0单克隆抗体将人1；抗拟溶于5生理，水中，取。5与等体积的弗氏完全佐剂超声乳化，自足垫部注射46周雌性，1小鼠。双足坫免疫茧足部肿胀为宜。2周后用等量抗原与不完全佐剂混匀后同上述方法免疫。1周后连续胯周用1识加强免疫基金项目国家九科技重点攻关资助项目96后，免疫小鼠淋巴细胞与12细胞按24在50犯4300中融合，分置于己加有腹腔细胞3父44，4孔的96孔板1培养基中迸培养。1周后半量换液，换液341厂可杂交瘤细胞稳定生长，1周后开始取杂交瘤上清筛选阳性细胞株。

　　鼠抗血清的制备同中的1.或2.法免疫小鼠，将免疫好的小鼠眼眶放血收集抗血清。

　　兔抗血清的制备将弗氏完全佐剂与抗原混合制成乳状液体免疫家兔，共8次，当效价达到12000，颈动脉放血收集抗血，1十笮克降抗体的筛选与克隆化杂交瘤细胞在，培养液中生长形成克降后，其中仅少数是分泌凡单克隆抗体的细胞，而且多数培养孔中有多个克隆生长，分泌的抗体也可能不同。因此，必须进行筛选和克隆化。

　　1.1讽单克隆抗体的筛选要求所测抗体的方法高度灵敏快速特异，且便于大量检测。常用反向间接血凝试验向各孔加入万叫生理盐水，用稀释棒蘸取各待测上清依次转动稀释。同时，用小鼠抗证抗体作为阳性对照，说1完全±，养液为阴性对照；再向各孔加入250.5的兔抗小鼠1801致敏3耶0在微型震荡器上震1士，37，3后观察结果。

　　0.01moVL9.6碳酸盐缓冲液也被正抗虬付孔1七其余按常规方法进行，1！200，稀释鼠抗1识为阳性对照，未被免疫的正常小鼠血清作为阴性对照。00值高于阴性310倍者为阳性杂交瘤。

　　2.杂交瘤细胞克降化为防止尤关克隆的过度生长，对阳性孔需进步克隆化。常用方法有所取稀释法软琼船法。认微挑选法等，效价测定采间接EUSA法和反llj间接血凝试验。

　　Westemblot付纯化的牛及人1讽抗原迎厅非还原性3161；1分离后，电转移至脱斑点免疫法将不同浓度的1正点于膜上，冷风干燥后，重复点样共207点，余按识抽1方法进行封闭漂洗加样和显色。

　　中和抗体试验将对数生长朗的3细胞按5000个细瞅10，叱，加入96孔板中，用1207胎牛血清的，肘刚培养液培养241阴性对照孔加入1的从孔实验孔加0沙稀释的，正咕克隆抗体与1几的；中和17的孤1喊孔；宁白对照以。4胎卞血清的0河碰培养液代替。连续培养36后，于显微镜下观察细胞数量及生长状况，叫尸1介7的定量分析临床起效剂量甚微，在下即可发挥生理作用，其作为药品的常规用量亦多在数百纳克至几十微克间，经典的蛋白质测定方法己无法检测到。冯，等1结常规0法，用兔抗1+；抗体作为第抗体辣根过氧化物酶标记羊抗兔1私作为第抗体22连氮双3乙基苯并噻唑啉磺酸，她。，为底物，0亍研制开发了仿检测试剂盒，建立快准确祝分析微量队，控制，对含有18药物成品的质量监控以及临床上对的检测。

　　用于1识疋的定位检测SohukeOstfioff等1应叫接免疫过闱化物酶技术，通过亲和纯化的高度专性抗血清检测了大量的人正常的炎症的和肿瘤组织上的1巩，以确定其在细胞中的分布他们发现在正常的胸腺胎盘组织，特别是树突细胞中含有成，在皮肤活体组织的基底细胞和腺体内皮细胞也有高水平达，在这些部位的慢性炎症组织中相应的纤维细胞和皮细胞也明！洲生，在瘤组织，浸润性细胞和内皮泡优势生分1伽坐。等1用31阶；‘抗体鼠视网膜损伤恢复中对扣厂进行免疫组化定位，发现证在氪激光致凝损伤中心增生的视网膜内皮细胞细胞核和细胞质，以及损伤周围的视网膜内皮细胞核，均有免疫活性。6等14用体细胞融合技术产生了个1讯正单克隆抗体002作为种功能性抗体，它在检测1讽对细胞生长发育增殖等生理过利的作具重要意义，在从免按咖咖，说明书进行杂交，砂析免麟化，肺广泛的应用。

　　了683842等4种0厂单克隆抗体，以识别牛1识正的完整的或失去氨基末端的结构风单克降抗体842被用于两步工15以发现1讽；的完整站构，这种对38.5 6，1的柬；很敏感而且不会被牛脑中的酸性成纤维细胞生长1风单克隆抗体可被用于区别天然的和去除1 15氨坫酸的柯。并能把1介0和；及其他的生长人1子1分开，及其抗体研宄的深入，发现通过抑制证生物活性从而抑制某些组织病变，阻断疾病的发生发展，为些疾病的治疗提供了新的方法。

　　治疗视网膜，生视网膜增生是糖尿病患者常并发症阽，士等16从内皮细胞和外脱细胞的相互作⑴以及外膜细胞的砧型改变阐明了视网脱，生免疫疗法的机制。他们克隆培养了正常和忠糖尿病兔视网脱内皮细胞和外膜细胞。发现在休外来自千小常兔的外脱细胞条件培养基付患糖尿病兔内皮细胞血管生成的刺激作用大于正常的内皮细胞，而1讯疋和转型生长因子1310iiggrowthfactor 3731对柳以沾忠者内皮细胞血管生成的刺激也大于正常的内皮细胞。这。提明，糖尿病患者内皮细胞，殖速役人厂正常的内皮细胞。而来自掂以病兔的外膜胞糸件培痄坫。对正常内皮细胞血管生成的刺激作用大于正常兔外膜细胞条件培痄战，则说明糖以坫患者外脱细胞比正常夕膜细胞分泌出更多的血矜生成因上述结果说明，糖尿病患者视网膜增生是由于内皮细胞和外膜细胞的相互作用及糖尿病患者内皮细胞和外膜细胞的吧改变引起的他们同时还发现来自正常和患糖尿病兔的外膜细胞条件培养基的血管生成作用促有丝分裂作用和迁移活性均同样地被1；1抗体抑制，这为应用31奶；1抗体治疗糖尿病患者视网膜增生提供了有力的依据。

　　治疗肌内膜，生肌内脱增生是动脉重迮手术中常并发症凡呀研究聚氟乙烯动脉移植后祖也队衫以隆抗体付滑肌增生的抑制作用。他们发现聚氟乙烯移植后，在结合部位和移植部位柬；付滑肌细胞增生起着驳作，31例1多穴隆抗体能抑制1十活现丝氨酸蛋白凝血酶在血管壁的愈合及肌内膜增生*终形成中具有主要作用，它刺激平滑肌细胞释放，更多的1介；而引起肌内膜增生，抗体可抑制凝血酶促有丝分裂作用。从而阻断肌内脱，生的形成，治疗矽肺纤维化砂肺是矽尘作业中常多发的重要职业病，至今仍无有效疗法。刘凯珊等19根据矽肺病变规银针对成纤维细胞是纤维化的关键和巨1阶胞能够释放讯；而刺激成纤维细胞增生的爪竖环节，采抗机；血沾中和柯，减少成纤维细胞的，生，从而阻断病变的发生发展。

　　治疗肾癌肾癌是种富含血管的肿瘤，血管形成是肿瘤生长侵袭甚至转移所必需的。作为血管形成因子不但能促进肿瘤血管形成，还具介导肿瘤生的作肾癌发生发展过不1中己受到人们的重视。此等2，研究发现肾癌组织中可提取分离出疋，其能够促进肾癌细胞片1逍咖1她3报进肾癌病人血清中7含量，高，进步明肾癌能够合成及分泌只，其水平与肿瘤病理分级分期士1相关。这些说明个桃衫田胞枘殖和血管形成；泞面起打屯要作，9发现，抗体能够抑制榀细胞1等14发现加1；抗体12付体外培养的幼仓鼠肾脏内皮细胞上证0位点具有高度亲和力，对个血管发生的鼠肾内体模型中1识对血管生成的应答具有高度抑制性；此等24也报道1抗体可完全抑制肾癌细胞微血管内皮细胞血管形成。这些研宄成果为肾癌的治疗提供了新的思路，治疗膀胱癌在膀胱癌组织中，达著高于正常组织训增，膀胱癌肿瘤微血管形成能力及肿瘤细胞增殖能力，1讽异常达是膀胱癌肿瘤生长快恶性程度高浸润深入易复发的重要因素之152实验明1抗体能够抑制肿瘤生长。这为今后掌胱癌治疗提供了新的途抒治疗神经胶质喃1柬付来自冲经外胚层和中胚层的细胞具有促有丝分裂作用，可促进细胞的增殖和血管的形成，其在人神经胶质瘤组织和细胞中高水平达，可能与胶质瘤的进展有关2！。

　　城望随着扣，研究的不断深入，它在临床上的应用越来越广泛，因此应用证0厂抗体技术纯化检测1孤亦愈来愈受到重视。特别是近来发现0在些肿瘤细胞中有显著达，是些肿瘤的标志物。勾肿瘤的发生发展关系密切，片此抗1讽正单克隆抗体的研制，将为国内开展对肿瘤的诊断治疗，以及研究1讽正与肿瘤发生发展机制的关系，提供重要的试剂。而应用1讯正免疫疗法也为些疾病的预防和治疗提供新的途抒和方向。针对目前鼠源兔源抗体临床治疗存在的免疫源致敏反应问，己有研宄人员致力于人源抗体的开发，这将成为1介抗体研允的1个新的起点参考文献I5李校坤，林剑。细胞生长肽1职能促进神经再生与修复1.山东医药，.